Quelles sont les étapes de réalisation d'une RT-PCR à partir d'un échantillon de sang jusqu'à l'obtention du résultat?

Pour réaliser une RT-PCR à partir d'un échantillon de sang, suivez ces étapes :

1. **Extraction de l'ARN** : Utilisez un système d'extraction automatisé comme le MPure-12™ pour purifier l'ARN à partir de l'échantillon sanguin, garantissant un haut rendement et une pureté optimale.

2. **Synthèse de l'ADNc** : Incorporez une transcriptase inverse pour convertir l'ARN en ADN complémentaire (ADNc). Cette étape est cruciale pour la PCR ultérieure.

3. **Mélange de réaction PCR** : Préparez un mélange contenant l'ADNc, des amorces spécifiques, Taq polymérase, des dNTPs, et des sondes qPCR (par exemple, sondes TaqMan pour augmenter la spécificité).

4. **Amplification** : Effectuez la PCR en temps réel, mesurant l'accumulation du produit d'amplification au fur et à mesure. Utilisez un thermocycleur pour effectuer des cycles de dénaturation, d'hybridation et d'élongation.

5. **Analyse des résultats** : Interprétez les données de fluorescence pour quantifier l'ADNc initial. La phase exponentielle de la PCR permet une quantification précise.

Ces étapes garantissent une détection sensible et spécifique des cibles ARN à partir d'un échantillon de sang.