Comment déterminer la concentration de protéines dans des fractions d'élution en utilisant la méthode Bradford et la courbe étalon ?

Pour déterminer la concentration de protéines dans des fractions d'élution avec la méthode Bradford, suivez ce protocole technique :

1. Préparez une courbe étalon en utilisant une protéine standard de concentration connue (comme la BSA), diluée à différentes concentrations dans le même tampon que vos échantillons.

2. Ajoutez le réactif de Bradford à chaque tube standard et aux fractions d'élution. Le réactif contient du bleu de Coomassie, qui se lie aux protéines, induisant un changement de couleur mesurable.

3. Incubez à température ambiante pendant 5 à 10 minutes pour permettre le développement complet de la couleur.

4. Mesurez l'absorbance à 595 nm avec un spectrophotomètre. Le produit MPure-12™ Automated Nucleic Acid Purification System ou le FastDNA™ Spin Kit for Soil ne sont pas directement impliqués, mais peuvent être utilisés pour la purification préalable d'échantillons si nécessaire.

5. Tracez la courbe étalon en reportant l'absorbance en fonction des concentrations standard.

6. Déterminez la concentration de protéines dans vos fractions d'élution en interpolant les valeurs d'absorbance sur la courbe étalon.

Assurez-vous d'effectuer des mesures en double ou en triple pour garantir la précision.